非瘟弱毒如何早发现？7位实战专家总结出经验

经过3年的实践和探索，生物安全已经渗透到猪场管理和运营的各个环节，养猪行业对于生物安全的认识也在不断进步和革新。5月16日，在第二届中国畜牧业生物安全大会圆桌论坛环节，7位业内知名专家、养猪人和企业代表共同探讨了“生物安全的经验与教训”。

 
主持人——薛永钦（福建省畜牧业协会会长、福建永诚农牧科技集团有限公司副总裁）
 
仇华吉（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研究员）
刘艳书（湖南新五丰股份有限公司总经理）
唐堇芾（万年鑫星农牧技术总监兼养猪事业部总经理）
王科文（硕腾（中国）猪事业部技术总监）
于高水（山东鲁抗舍里乐药业有限公司技术总监）
谢世峰（江西达葆维生物技术有限公司总经理）
吴正宏（沃华生物猪苗事业部总经理）
 

福建省畜牧业协会会长、福建永诚农牧科技集团有限公司副总裁薛永钦主持圆桌论坛

1、问：做好非洲猪瘟的检测是实施生物安全的重要一环，在非瘟检测中如何避免假阴性？在非瘟弱毒株早期检测诊断上是否有经验可以分享？
仇华吉：检测结果出现假阴性，主要是因为检测方法敏感性不够、采样不当或样品中可能有干扰因子。猪场可以通过比对试验进行试剂盒遴选。现在国内比较好的试剂盒的敏感性可以检测出1个拷贝。此外，样品不适宜、采集时机不当或样品本身有抑制扩增因素，也会导致假阴性。建议尽量采集各类样品，特别是容易检测到核酸的样品。非洲猪瘟病毒首先通过鼻咽途径排毒，所以咽拭子是比较好的样品。母猪比较容易感染非洲猪瘟病毒，建议采集脐带血、生产过程中的阴道拭子，这些样品都是比较容易检出的。除了样品，对高度疑似的猪可采取血液样品，或者通过穿刺采集淋巴结或者肺脏样品（此方法对猪只应激过大，应慎重使用）。无论是强毒株还是弱毒株，淋巴结的检出率都是相对较高的。特别是弱毒株，从肺脏样品中也相对容易检测出来。另外，实验室质控、操作人员规范性、试剂盒质量、样本的保存运输和提取以及设置必要的阳性、阴性、内参对照等也非常重要。
 
王科文：检测拷贝数比较低的样本建议选择质量好的试剂盒，以及增加PCR循环数，我们一般增加到45个循环。另外，针对可能拷贝数比较低的样本还要做平行样，即一个样本做2次。比如出现有一个38或41个循环左右起峰，一个没有起峰，那么可能要重复再做。如果两个样差不多都在41、42个循环左右起跳，那么我们认为还是阳性的。
 

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研究员仇华吉

刘艳书：避免假阴性，首先选择的试剂要敏感，第二采样要准确，第三样本不能过度稀释，第四运输过程中避免降解、第五实验室操作过程要稳定规范。关于非瘟感染早期发现，可以通过淋巴结穿刺的方法来检测，检出率比较高。如果把检测环节的细节做到位，应该是可以对非瘟防控起到很好的作用的。我们每头出栏猪检测成本大约在8元左右，目前看来是防控非瘟非常好的有效途径。没有检测、没有拔牙就没有中国的养猪业，目前技术已经非常成熟。我们每个猪场日常设置了必检项，所有进出的人、物资、车辆，都要采样，关键环境要采样，异常猪要采样。并不是发生了非瘟才做检测。另外，个人认为弱毒真正影响还不是很大，主要还是野毒株比较厉害。
 
唐堇芾：假阴性对猪场危害非常大，也是生产过程中经常遇到的。如果猪出现疑似症状我们哪怕检测到是阴性，也会要求隔天采样检测直到采食量完全回复正常。对死亡的猪一定要采淋巴结、尾根血检测。如果只是采食量出现异常，会采唾液样、口鼻拭子、尾根静脉血检测，如果治疗效果确实不好，还会测抗体。总之因为再好的试剂盒也会有假阴性现象出现，我们会采取各种方式排查假阴性，减少对生产上产生的困扰。
 

湖南新五丰股份有限公司总经理刘艳书

于高水：实验室操作规程一样，操作人员不一样，结果也会千差万别，所以人员素质非常重要。第二，对采样要求保证准确性，样品清洁度也要注意；第三，对CT值的把握，不同浓度拷贝数呈现出来的阴性和阳性是不一样的，浓度低的时候甚至近50才会起峰；第四，后续操作和数据处理可能也会有假阴性出现。
 
2、问：猪价下降是最近养猪业比较关注的事。猪场在降低成本和完善生物安全方案上如何做抉择？
吴正宏：针对规模场和集团客户，生物安全上较高的长期硬件投入其实早期已经投入进去了，后面再考虑降成本可能会适得其反。
 
谢世峰：生物安全应该是针对所有病原微生物的，它们之间会相互影响。另外饲料营养与免疫水平相关，做好饲养营养对提高猪群抵抗力健康度有显著作用。
 
刘艳书：第一，要正确理性对待猪价，暴利时代是不可能持久的，目前这个猪价是合理正常的。第二，我认为安全和成本是倒三角的关系，失去了安全，成本的投入回报都等于0，所以在生物安全上我们是有明确的预算的。第三，养猪企业一定要有正确的成本意识，不是行情低了就不投了，而是要合理、高性价比的投入。
 
唐堇芾：生物安全是日常的工作，降低成本是猪场的未来。当前生物安全投入的成本非常高，我们会考虑选择优质但是成本低的消毒剂品类，比如氯制剂。另外我们对物资进出频率进行了严格规定，比如兽药疫苗半个月进1次，食材5天进1次。减少物资进出频率就可以减少采样频率。通过实施这些措施，整体成本比以前有明显降低。
 

万年鑫星农牧技术总监兼养猪事业部总经理唐堇芾

3、问：随着时间推移，非洲猪瘟在我国的流行情况发生了一些变化，请问非洲猪瘟防控形势发生了哪些新变化，在生物安全上是否需要作出相应的调整？
仇华吉：我国的非洲猪瘟防控形势发生了很大变化，养猪产业从认识、理念、硬件、软件上都有相应提升。同时非洲猪瘟病毒本身也在变化，毒株趋于复杂化，估计在相当长的时间内，净化或根除非洲猪瘟清除是很难的，常态化成为现实。在应对措施上，第一，非洲猪瘟防控需要依靠生物安全，同时还要有系统化思维，不能单纯依赖阻断，而要把养猪的各个环节都纳入防控体系中，基于生物安全的综合防控是比较合理、可行的做法；第二，我们理解的生物安全需要科学、精准，要基于事实而不是想象，基于科学而不是迷信，不能流于形式化、程序化。大的养猪企业要做减法（当然不是什么都减），要把更多的资源和精力投入到关键的风险点上，比如病死猪、粪污、引猪、售猪、饮水、高风险人员等要优先、重点、有效防范，而饲料、兽药、生物制品、媒介生物、一般物资等属于中低风险，可以不纳入第一方阵。
 
王科文：变化是多方面的。首先田间流行株有增加的发展趋势，现在弱毒流行表现出现一些“看不懂”的亚临床表现，以及一些可能的潜伏感染。第二，出现和以前不同的排毒规律，以前测得准，现在可能间歇性排毒导致测不准。排毒规律变化对诊断带来了困难，临床上可能看到疑似猪，但是检测不到。另外，出现弱毒后，比较担心它将来会跟蓝耳病一样分布广泛。期盼采取区域性的行动和净化措施，建议猪场引种延长隔离期，并且要检测非瘟抗体。
 
吴正宏：变化主要是非瘟潜伏期时间变长了，临床表现不典型了。还是要按照原来的防控思路来，早发现、早检测，尽量定点检测，检测点分布更多更广，要舍得淘汰和生物安全投入。另外，采用联合免疫程序，减少免疫次数，减少接触感染风险。
 

硕腾（中国）猪事业部技术总监王科文

4、问：5月1日起正式施行五大区分区防控的政策。中南区作为分区防控的早期试点，执行情况如何？能否分享分区防控对整体区域大环境生物安全的提升有怎样的帮助？
刘艳书：方向是对的，对未来生物安全和整个疫病控制是有很大作用的，目前还是试行交流阶段。分区防控后行业之间技术、疫情等信息交流更顺畅。
 
5、问：江西的养猪布局在非洲猪瘟之后发生了巨大的改变，二位作为江西本土的企业代表，认为哪些改变是比较深刻的？在其中获得了哪些经验？
唐堇芾：小散复养进度还是比较慢的，基础设施比较差的猪场还没有复苏起来，除了规模企业外，饲料、兽药动保从业人员做的猪场比较多。最大的经验就是生物安全的执行落地还是人的问题，要考虑怎么把人的主动性调动起来。
 

山东鲁抗舍里乐药业有限公司技术总监于高水

6、问：非瘟弱毒株的出现对精准剔除带来的新的困难，请问目前来看在精准剔除上是否有新的办法？
仇华吉：对于弱毒株，要一分为二地看。弱毒的毒力没那么强，猪场一方面不要使用“弱毒疫苗”、避免引入带毒猪；另一方面，万一弱毒进入猪场，也要认识到其发病是有条件的，在保护猪上要多做点文章。

首先，通过早期细心观察，我们依然可以发现不太明显的症状，比如减料、精神沉郁、体温异常，及时甄别和“拔牙”是可以做到的；其次，弱毒进入猪场后也是可以酌情拔牙、清场或带毒生产的。假如弱毒在种猪中形成大面积流行，的确需要清场，但在育肥猪群还是可以继续饲养的，前提就是做好环控、充裕营养、精细化管理。这种情况我们其实在蓝耳病上经历过。非洲猪瘟弱毒株与猪蓝耳病野毒株有某种相似之处，即可以形成所谓的“阳性稳定”，就是因为一方面弱毒株有致病性，另一方面其致病力有限，扛过了感染早期就可以形成耐过的结局。在减少应激的基础上这种带毒是可以稳定生产的，但如果饲养管理条件很差，发病就在所难免。

耐过猪的比例与猪群健康度是成正比的，如果养得不好，猪是不太可能耐过的。当然，对于野毒株来说，耐过的比例相对较低。一旦弱毒感染或少量强毒感染形成耐过猪，也许检测不到核酸，但是可以检测到抗体，这也是为什么建议引种时同时要检测核酸和抗体。
 

江西达葆维生物技术有限公司总经理谢世峰

王科文：第一，还像以前一样对准疑似猪，采取多个样本，如口鼻拭子、深部咽拭子、尾根血，合样混测，检出几率会比较高；第二，发现弱毒后检测抗体90%都是阳性，且弱毒进入猪场后环境中更容易测到，说明反而要注意日常环境监控；第三，建议开发IgM试剂盒，可以在更早期检测到病毒感染。
 
7、问：保障源头物资安全是生物安全的重要一环，在环境污染面较大的情况下，除了猪场自身对进场物资做好检测、把好大门，上游企业如何保障产品在生产、保存、运输等环节安全？
王科文：我们有三个方面，第一，要求经销商送货频率降低，1天只能送1个客户；第二，运输车辆清洗消毒；第三，所有的货物采取多包装，送货后第一层包装要带回来。
 

沃华生物猪苗事业部总经理吴正宏

于高水：第一，生产上采用大部分自产原料，从原料上把控生物安全。第二，生产环节安排专人负责生物安全，从生产线到仓库，均是封闭式与外界无接触；第三，后期出货定期消毒，最后封膜；第四，与物流公司签订责任协议，在评价体系中加入生物安全要求，有专人负责。第五，在关键点把控上，制定相关制度，有专人负责；第六，对集团客户有定岗人员负责产品提供。
 
谢世峰：生产车间里有熏蒸消毒，车辆运输过程中也会采取熏蒸消毒保障产品安全。
 
吴正宏：第一，生产环节每一件货都有非瘟检测报告，结果呈阴性方可使用；第二，在包装上做了5层保护，疫苗瓶、塑料盒、塑料盒外纸盒、纸盒外面塑封膜、整件货塑膜；3、针对集团客户执行一对一配送服务。

圆桌论坛嘉宾合影