周沛：揭开非瘟病毒“伪装的马甲”，猪群采样如何避免误检？

《农财宝典》新牧网记者 李宗林
 
非瘟常态化形势下，消毒工作在猪场生产中的地位愈发重要，而如何科学消毒？消毒效果如何检验？业内往往缺乏科学的认知。2021年5月16日，在南方农村报主办，农财宝典、新牧网承办，宁波第二激素厂特约“2021第二届中国畜牧业生物安全大会”上，幻影三陆零特邀，华南农业大学副教授周沛给大家带来《非洲猪瘟消杀测评》，从非瘟病毒的组成、消毒剂测评步骤、消毒剂测评结果三方面为大家详细解读。
 
 
 

华南农业大学副教授周沛（幻影三陆零特邀）

 
非洲猪瘟病毒结构复杂，疫苗研发难度较大
 
周沛首先为观众普及非洲猪瘟病毒（ASFV）的组成，ASFV基因组大小约为170-190kb，巨大的基因组导致在检测过程中易核酸污染。并且ASFV是双链的、闭合的线性DNA病毒，其结构特性也决定了它在自然界中较难降解，且变异速度慢。周沛提醒广大养户“技术人员在生产现场检测到了病毒阳性，很多情况并不是活病毒，而是核酸的污染”
 
ASFV的基因组结构决定了其蛋白质编码特别多，据统计大约能够编码160多种蛋白质，其中包括许多未知的蛋白质，并且宿主来源蛋白多，其编码的蛋白质很多功能当下也没有研究透彻。基于其“蛋白数量多、未知蛋白多、未知功能多、宿主来源蛋白多”的四大特点，非洲猪瘟疫苗的研发难度大。

ASFV的结构复杂，基因由外囊膜、衣壳、双层内膜、核心壳层包裹，在如此多的蛋白质包裹下，有效保护了ASFV的遗传物质不被破坏，在消毒剂及消毒产品使用时，就易出现病毒外层蛋白质结构消耗消毒剂，病毒遗传物质依然保留的情况。
 
病毒最外层存在着外层囊膜结构，囊膜是来源于宿主，也就是猪只本身，这个“伪装的马甲”使得病毒伪装效果非常好。非洲猪瘟病毒颗粒大，直径约260nm的大小，但是庞大的颗粒并没有使得它容易被装置空气过滤，实际上相比几十纳米的颗粒，300nm左右的颗粒布朗运动缓慢，反倒更易穿过空气过滤装置。
 
消毒剂检测要遵循科学，三大问题需要注意
 
在猪群监测过程中，采样工作其实是有科学的公式可以参考的，科学的采样方法可以减轻工作量避免“头头检”，一定程度上也可以避免漏检。消毒测评过程也应遵循科学，据周沛介绍，具体过程可分为三个阶段：消毒剂与病毒反应-中止反应-接种细胞，其中有三大问题需要注意。
 
首先，我们需要关注消毒剂对细胞有没有影响？消毒结束后病毒接种在细胞皿上能否增殖，取决于病毒是否存活、细胞是否存活两方面因素。为避免假阴性，消毒剂对细胞的影响一定要检测，残留消毒剂的去除方法，包括“中和法、过滤冲洗法、稀释法”。周沛表示，经过实践摸索，稀释法会更加稳定。
 
第二点，在做消毒剂评估时，需要经过巨大的稀释，而病毒经过稀释后，还是否呈现阳性也有待考究。周沛建议，病毒经过稀释后含量一定要大于103，只有当病毒含量足够大时，才能证明检测效果。
 
第三点，一定要设立阳性对照组。而阳性对照组的选择也是有讲究的，病毒检测与消毒剂检测一样，都需要中止反应后再接种细胞。
 
最后，周沛向观众们展示了实验室消毒剂测评的结果。物理灭活ASFV方案中，高温消毒在55.2℃以上消毒效果较好；暴晒在40min以内能将病毒有效杀灭；干燥也具备一定的效果，但基于其时间周期较长并不推荐。
 
 
 
同时周沛也向观众分享了各类消毒剂化学灭活ASFV的评测。根据表格可以发现次氯酸、二氧化氯、季铵盐在短时间内就能达到有效杀灭病毒的效果。氯制剂虽然能够有效裂解ASFV核酸，但是有机物对其影响较大。同时周沛提醒观众，消毒设备的升级也会对猪场ASFV的杀灭起到较大帮助。

幻影三陆零展位展示