口腔液体收集实用指南

最近的大流行（人类感染COVID-19，猪感染非洲猪瘟）表明，需要系统地收集猪群健康数据，以了解情况并指导有效的应对措施。收集猪群健康数据一直是个问题，因为临床体征变化很大，而且个体动物的取样/测试费用昂贵。相比之下，基于口腔液体的监测则简单，准确且成本低廉。

将一定长度的棉绳悬挂在猪栏中，让猪咬/嚼绳子，然后从湿绳子中回收口腔液体，从个体猪或猪群收集口腔液体。已证明超过23种猪病原体在口腔液体中产生可检测水平的核酸和/或抗体，包括最重要的疾病（例如，非洲猪瘟、经典猪瘟病毒、口蹄疫病毒、甲型流感病毒、圆环病毒、猪流行性腹泻和蓝耳病毒）。在北美，口腔液体被广泛用于监测猪群，例如，爱荷华州立大学兽医诊断实验室在2010年至2019年间对猪口腔液体样本进行了约140万次测试。

最重要的事项：

1. 你的长期健康目标是什么？监测将如何帮助你实现猪群的健康目标？
2. 了解口腔液体收集过程。网上有很多关于口腔液体收集的视频。

口腔液体收集：

1. 提前准备。准备好所需物品（绳索、刀具、样品管等）。保持生物安全，即避免在猪舍之间运送物资。
2. 清晨收集样本。早晨，猪比较活跃。如果有饲喂时间表，请在饲喂前收集。
3. 清晨收集样本。早晨，猪比较活跃。如果有饲喂时间表，请在饲喂前收集。
4. 取样对象？通过收集每窝猪（母猪和仔猪）的口腔液体对断奶前的猪进行采样。可从≥21日龄的仔猪（包括群饲母猪）收集单个或整个猪栏的口腔液体。可以从单独饲养的公猪和母猪上收集口腔液体，但需要培训（请参阅#3），在大型商品系统中通常不实用。
5. 遵循常规。在一天的同一时间把绳子挂在同一位置以形成习惯。猪会很快学会这个过程，并且知道在随后的取样中该做什么。一旦建立了一个模式，收集时间可以缩短到20分钟。不要将绳子长时间留在猪栏中（数小时），因为（a）随着时间的推移，绳子会慢慢变干，样品就会丢失；（b）如果停留时间过长，猪会破坏绳子；（c）猪对绳子失去兴趣，会对其视而不见。
6. 避免样品过多污染。将吊绳的底端设置在猪的肩膀高度处，以避免接触地板。有机物质不会直接对测试结果产生负面影响（RT-PCR或ELISA），但在实验室更容易对干净的口腔液体进行移液和处理。
7. 每个样品使用一个干净的塑料袋和塑料管。为了采集样本，将绳子湿润的部分放入塑料袋中，提取口腔液体，然后将样本放入容器中（预先标记）。收集样品后，请取下绳索，以保持猪对绳子的新鲜感（猪也会对事物失去兴趣）。
8. 保管好样品。收集后立即放在冰上或冷藏箱中冷却（4°C）。根据Pickett等人（2010年）的数据进行的计算得出，PRRSV RNA在口腔液体中的半衰期为30°C下约13小时，20°C下约42小时，以及10°C以下≥14天。在30°C下约72小时后， 口腔液体中未检测到PRRSV抗体。y was detected in oral fluids after ~72 hours at 30°C.

监测程序:

1. 收集多少样本，多久收集一次？做任何事都需要在预算之内。在每个猪舍（或房间）以固定的间隔（每隔2至4周）采集几个样本（2至4个）也能很好地说明猪群健康史与猪群生产力的关系（图1）。
2. 制定一个评估长期监控数据的计划。例如，统计过程控制图表。
3. 在猪舍内使用“固定空间采样”以最大限度地检测。关于猪舍或位点中“固定空间采样”的解释，可在线查阅：
   1. 英文版口腔液体采样指南
   2. 西班牙语版口腔液体采样指南
4. 期待意外。制定一个验证或反驳意外结果的计划，例如，重复测试两次，重新取样，或使用不同的分析方法进行测试。
5. 记录病史来制定计划。核酸检测可检测病毒的早期存在，而抗体检测可检测免疫反应。这两种技术在监控方面的效果更好，例如，将动物从隔离区转出。

其他考虑因素：

1. 斑马和马……看起来相似的事物可能有所不同。 看起来与口腔液体类似的标本，例如口腔拭子或鼻拭子，随着时间的推移可能无法提供相同的检测率。 表1列出了甲型流感病毒，口蹄疫病毒，A型塞内卡病毒和蓝耳病病毒的示例。
2. 不要将收集的口腔液体样本集中在一起，不要将在一个猪栏使用的绳子在另一个猪栏使用。这些过程不但不能提高检测效率，反而会产生假阴性。
3. 避免冻融和/或极端温度波动。口腔液体中的抗体可以耐受多次冻融循环，而核酸则不能。如果需要对一个样品进行多次测试，最好的方法是将样品分成几份，每次测试使用一份。在猪场，不要将样本储存在自动解冻的冰箱中，因为循环解冻可能会损坏核酸。在实验室中，在4°C（非室温）下解冻口腔液体样本可优化PRRSV RNA的检测（Weiser等人，2018年）。

表1：口腔液体核酸检测与猪口腔拭子或鼻拭子的比较。

nd = 没有数据。

基于猪栏的口腔液体样本和个体口腔拭子评估阳性率（平均值）。数据来自Hole等人（2019年）；Pepin等人（2015年）；Romagosa等人（2012年）；Senthilkumaran等人（2017年）。

来源：pig333