猪场病料采集及注意事项

猪场病料采集有多种类型，包括鼻拭子，口腔拭子，肛门拭子，血液样及各类组织样，当前非瘟荧光PCR检测使用较多的是鼻拭子、口腔拭子及环境样拭子，猪场常规监测更多的是应用ELISA检测血液中抗体的变化，如果想做抗原检测会取内脏组织样做PCR检测或分离病毒细菌。采集不同类型的样品有着不同的方法及注意事项，这里重点介绍血液样及组织样的采集及其注意事项。

一、做好人员、物资、运输方面前期的准备。

要求采样人员采样技术熟练，如无相关经验最好做简单培训再操作；按计划采样时保鲜袋、自封袋、真空采血管及EP管数量要充足，同时最好备有一台高速离心机；采集好的病料要能及时送达实验室，应作好相关的运输计划安排。采样器、保定绳套等还要注意消毒、运输容器及冰块也要提前准备好。要求做好各项准备工作后再进行样品采集。

1. 一次性注射器（5mL），10 毫升抗凝管，酒精棉球若干（采集血样）

2. 2mL 离心管，棉签（2 支/头），500mL 生理盐水（采集唾液拭子）

3. 10mL 离心管，淋巴取样器（1 支/头），500mL 生理盐水，酒精棉球若干（采集淋巴）

4. 解剖刀柄（1 把），解剖刀片（1 包）（采集组织样品）

5. 一次性手套若干双，乳胶手套若干双，防护服若干套、水鞋（1 套/人）， 保定绳（8根），记号笔3 支

6. 带冰袋采样泡沫箱/车载冰箱（1 个），3%烧碱消毒桶（1 个），1：200 卫可消毒桶（1个），高于70 度水温消毒桶（1 个），75%酒精（500mL），生石灰若干

二、血液样采集

1 采血前先做好猪只保定。

（1） 保定绳在水温超过70 摄氏度的消毒桶先浸泡10 分钟；

（2） 采样人员穿上工作服和干净的水鞋，带上乳胶手套，外套一次性防护服；

（3） 人员脚踏3%烧碱消毒桶，进入栏舍；

20Kg 以下猪只取仰卧保定，20Kg以上猪只以保定绳套保定，让猪的胸前凹窝充分暴露。

2 采血。

（1）尽量取前腔静脉采血：猪前腔静脉，在第一对肋骨间的胸腔入口处的气管腹侧面，由左右两侧颈静脉和腋静脉汇合形成。该血管在一周龄猪直径约5毫米，成年猪约1厘米以上。采血部位在第一对肋骨与胸骨柄结合处直前，但由于左侧靠近隔神经，以右侧采血为宜。

猪前腔静脉采血图

（2） 选用合适的注射器及针头

公母猪宜选用16号 50mm针头；30kg以上的中大猪，宜选用12号38mm针头；10-30kg小猪，可选用9号 25mm(一次性注射器常配的针头)；10kg以下仔猪，应选择9号 20mm针头。

（3）选准进针的部位

一般来说，30千克以下的小猪应采两前肢与气管交汇处，种公母猪和30千克以上的中大猪可选颈部最低凹处。进针时又要掌握好一定的方向、角度和深度，要及时调整。血管被刺穿，会引起血肿，要立即停止采血，须换另一头猪采血。特别要注意的是对仔猪采血时，不能太猛、太深，以免伤及心包或心脏。

3 血液样保存及运输

（1）用真空采血器采集的血样，直接倾斜放置好。

（2）夏天在常温下放置一段时间，冬天要放置在25～37℃温水中一段时间，以利于血液中血清的析出。

（3）血样送检时，在保温箱加适量的冰块防止血液变质，送检过程中尽量防止剧烈振荡。

需要指出的是，血液和血清是完全不同的概念！血清是血液的组成部分，它必须从血液中分离出来后，才能用于血清学试验，但这种分离过程需要专业人员来操作。因此，采集的血样，最好在凝固后，直接送到检测单位，以保证血清学试验的正确进行。一般采血2～5毫升就足以满足实验室诊断的用量了。【提示，用于血清学试验的血样，不能加任何抗凝血剂！】

4、血液样采集注意事项：

（1）擦拭采血部位的酒精未干，不要立即采血。血液混进酒精后易造成溶血（使检测结果不准）；

（2）血液在运输过程中，防止剧烈展荡，使血细胞破裂引起溶血（要注意血液防震）

（3）血液存放的容器要确保干燥。

三、组织样采集：

（一）疑似猪瘟的病料采集：

1 放血。先把猪腋下动脉放血处死。

2 解剖摘取扁桃体。从胸部中线偏右处，切断肋骨，打开胸腔，在气管与肺脏连接处向前5～10厘米位置，割断气管，并顺着气管向前割开，直至咽喉部，从后向前将气管割断一半，这时就可以在舌跟靠近上腭的左右两边看到两个淋巴结，即扁桃体。小心取下扁桃体放置于干净的保鲜袋中，并做标记。

3 解剖摘取肺门淋巴结。一只手握住气管切断处，使劲向外拉出肺脏，另一只手帮忙扯断肺脏与身体的连接，并将整个肺脏翻转过来，使背面向上，此时可在支气管与肺脏连接处，找到分别位于左右两侧的两个肺门淋巴结，小心摘取，放置于另一个干净的保鲜袋中，并做标记。

4 肺脏样品的采集。如有必要，可割取部分肺脏样品，一般只要割取介于病变和正常组织之间的部分，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记，当然也可以将整个肺脏保存。

5 解剖摘取腹股沟淋巴结。将两条后腿，向下向外压，就可以在两侧凹陷的腹股沟处中间部位，看到微微或明显的隆起，即腹股沟淋巴结，小心割开皮肤和淋巴结表面的被膜，小心摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。

6 解剖摘取脾脏。沿腹中线将腹部皮肤、肌肉和腹膜，小心切开并打开腹腔，在腹腔的左侧位于胃和回肠下面，找到脾脏，小心摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。

7 解剖摘取肠系膜淋巴结。从腹腔的右侧位于肝脏和胃下面，找到肠系膜，在肠系膜靠近肠道的末端，可以看到很多结节，即肠系膜淋巴结，小心摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。

8 流产胎儿。对于新鲜流产的胎儿，可作为检测样品。对于流产日龄较早的胎儿，可取整个胎儿保存；如果是晚期流产的胎儿，最好根据上述步骤，摘取相应组织，保存送检。

（二）、疑似蓝耳病病例的病料采集：

具体病料采集程序与猪瘟病料的采集基本一致（包括步骤1、3至6、8），需要强调的是，在蓝耳病的检测中，必须包括淋巴结和肺脏样本！如果检测流产胎儿，那么，最好能剪取部分胎衣液或剪取胎衣样本，保存方法同上。

（三）、疑似圆环病毒感染病例的病料采集：

对于疑似圆环病毒感染的病例，病料采集包括步骤1、3至7。记住，在圆环病毒的检测中，必须包括淋巴结样品。

（四）、疑似伪狂犬病病例的病料采集：

因伪狂犬病病毒可危害呼吸系统、繁殖系统或中枢神经系统，因此，病料采集包括步骤1至8。同时，还要采集神经系统的样品。具体步骤为用手术刀片将猪的头皮剥去，露出头盖骨，然后用凿子（也可用一字螺丝刀），轻轻凿开头盖骨，并清理骨头碎片，等整个大脑露出后，小心用手摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。

（五）、疑似流行性腹泻病例的病料采集：

本病的病料采集，包括步骤1、5、7。同时需要采集肠道样品。从腹腔中剪取病变的小肠10～15厘米，从一侧将肠道剪开，轻轻刮去肠道内容物，然后放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。

（六）疑似流感病例的病料采集：

按照上述方法采集肺脏和淋巴结即可。

（七）检测病料的运输注意事项：

（1）死亡的猪应尽快采集，夏天不应超过2小时，冬天不超过6小时。

（2）采集猪的病料必须新鲜，要采集有病变部位的材料，尽可能减少污染。

（3）用于检验的内脏组织块不必太大。但取样要有代表性 对每一器官，应在各个不同部位多取几块组织，并且病变部分应尽量附带一些周围的健康组织。

（4）无论是运送新鲜的病料还是冰冻的病料，保证整个过程中，病料始终处于低温状态。

（5）送检过程中要防止倾倒、破碎、避免样品泄漏，要注意有的样品不能剧烈展荡，要注意缓冲放置，所有样品都要贴上能标示采样猪的详细标签。