非瘟处置争分夺秒！复养、精准剔除、日常监测如何做好检测？

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当前，非洲猪瘟疫情仍然时有发生。今年3-4月份累计报告14例疫情，直追2019年同期的16例。众所周知，非瘟是烈性传染病，且潜伏期较长。那么，在非瘟常态化之后，猪场应该如何做好非瘟检测，从而实现早发现早处理？

5月8日，爱德士大中华区市场总监马祥就非瘟检测相关问题，做客新牧网新猪派“稳产保供、抗击疫情”技术讲座直播间，作《非瘟检测那些事》主题报告，为大家分享了精准剔除的检测方案、复养的检测方案、定期监控方案等三大方案。

精准剔除检测方案4原则

马祥介绍，精准剔除需要提前做场内人员培训、应急物资准备、实验室准备。场内人员培训包括ASF知识及预警报告制度、猪只处理流程、实验室人员操作培训、样品采集（唾液/鼻拭子/直肠拭子/血样/环境样品）。

应急物资准备包括物资（隔板/彩条布/消毒剂）、阳性猪只处理（掩埋场地、通道、人员）、阳性栏舍处理、饮水（水的处理）、饲料等。

实验室准备包括仪器采购调试、核酸提取试剂以及RT-PCR试剂盒确定（特异性高--敏感性高--稳定性好--操作简单）、人员操作、实验室污染处理等。

精准剔除的技术路线包括正常生产风险评估和精准清除阶段。当发现疑似病例之后，从车辆、人员、环境、物资等方面进行检测分析。确诊阳性之后的精准剔除有4大原则：筛查原则、混样原则、淘汰原则、新增病例处理原则。

筛查原则：首先全场采样筛查，7天内检测两次，两周内对母猪群进行4-6次检测，选择口鼻拭子为样本。

混样原则：推荐三合一混样，根据临床可适当调整。

淘汰原则：初筛阳性猪及低CT建议高规格淘汰，猪不落地；CT值33-36，直接淘汰，注意消毒；CT值低于28，隔断通槽。（以上CT值仅供参考，猪场应用需根据自身使用的检测试剂品质来建立）

新增病例：以此为中心，半径5米筛查，连续三天；整栋筛查。

复养猪场检测方案10 步骤

猪场复养之前，需要对周边疫情进行调查、溯源分析，对员工进行培训；做好猪场生物安全改造配套，建立监测体系，做好猪场清群后的处理。

马祥介绍，猪场最基本的硬件改造是洗消中心建立、人流和物流原则建立（生产人员更衣冲凉，更换生产内部衣物后进入生产线；卖猪时，人员赶猪后，不得原路返回）。

复养前还要对场地栏舍进行洗消，可以用烧碱+戊二醛。基本洗消流程参考如下：

1、用3%烧碱喷场地、墙壁、铁栏（注意人员安全防护），以初步清除残留污垢和灭杀病原；

2、采用清水高压清洗；

3、用2%的烧碱喷场地、墙壁和铁栏，以深度清除残留污垢和杀灭病原；

4、清水高压清洗；

5、戊二醛全面消毒一遍，以杀灭病原；

6、次氯酸钠类消毒剂全面消毒一次，灭杀病原同时去除病原核酸；

7、空栏7-10周；

8、粪沟直接用4%烧碱灭杀病原；

9、宿舍、饭堂清洗后熏蒸消毒；

10、通风、干燥。

定期监控，不同主场不同方案

针对阴性场、复养场和耐过场，马祥为大家分享了以下定期监控方案：

检测的样品采集方法介绍

非瘟检测中，应对车辆（运猪车、饲料车）、人员（头发、指甲、衣服、鞋底）、环境（场地表面、土壤、栏舍、通风设备、空气样品）、猪（口腔分泌物、鼻腔分泌物、直肠分泌物、血液样品、精液）分别采样。

环境采样：采样点包括：1、猪舍内部环境：猪栏表面，地面和侧壁，料槽或料线，猪舍门口。2、场内转运：出猪通道，挡猪板，出猪舍；3、无害化处理设施：病死猪存放地，病死猪掩埋地，土壤。4、饲料供应系统：饲料生产区，出料口，设备表面，料塔出料口。5、饮水系统：水源，猪舍饮用水。6、通风系统：风扇舍内表面，百叶或窗户，水帘。7、粪污处理：漏粪地板背面，粪沟侧面。

唾液采样方法：唾液采集袋或棉绳悬挂于栏舍内或定位栏前，猪只充分咀嚼6-8小时后取下，置于密封袋或胶袋内，剪去袋子一角后挤压棉块或棉绳，将收集的唾液滴至离心管中，合盖并标记编号送检。

对于按时饲喂的定位栏等猪栏，在喂料前半小时左右进行唾液采集。对于自由采食的大栏等猪栏，猪只充分咀嚼棉绳或棉块3-4小时后取下。

鼻拭子采样方法：使用前用无菌生理盐水浸润沾湿。采样时带上一次性手套，拿着棉棒的一端（一般每头猪头2个棉棒），带棉签的一端伸进猪的鼻孔3-5cm左右，在鼻腔的内迅速转两圈，拿出来后反脱下一次性手套，把棉棒套在手套里面，封上口（必要时需要保定猪只）。

将棉拭子放在离心管中，加入无菌生理盐水，浸泡30分钟，中间用涡旋机震荡，让目的病原充分洗脱在生理盐水里面，抽取浸泡后的上清进行DNA提取。

精液及血液样品采集：采用精液样本裂解处理---配合IDEXX专门的组织裂解液RealPCR TL-60ᶧ 缓冲液，1mL精液样本12,000 x g离心4分钟。在离心后弃去上清。然后加入400 uL RealPCR TL-60ᶧ 缓冲液，使用枪头吸打混匀。70°C孵育10分钟。将裂解后的样本15,000 x g离心1分钟,取400 uL澄清的裂解液于收集管中。

血液样品则可以采用前腔静脉采血、耳缘静脉采血、尾根采血等方法。